Agarplatten Herstellung mit Probleme

[Spori]

Hallo

Ich bin absoluter Neuling in Sachen Pilzzucht aber möchte es sehr gerne lernen.
Da ich Pilze liebe ist dies genau das richtig für mich.

Als erstes wollte ich mal eine Agarplatte herstellen um zu sehen ob ich ein Pilz Klonen könnte.
Also habe ich mich nach Agar Rezepten umgesehen und für das Bier Agar entschieden.

Also 0,5l alkoholfreies Bier aufgekocht und 8 Gramm Agar Agar zugegeben.
In Gläser abgefüllt ( Petrischalen sind bestellt ).
Bis hier sah alles sehr gut aus, die Platten wurden auch schön fest.
Also denke ich bis hier nichts falsch gemacht zu haben.

Nun wollte ich diese noch sterilisieren.
Also habe ich die Gläser mit aufgesetztem Deckel und Alufolie im DDKT Sterilisiert.
Nach der Sterilisation wurde das Agar aber nichtmehr so hart wie vorher.
Habe es auch ein zweites mal versucht und vor dem Sterilisieren noch etwas Agar zugegeben aber mit dem gleichen Ergebniss.

Was ich mit vorstellen könnte ist das durch die grossen Gläser zu viel Kondenswasser beim Sterilisieren entstanden ist.
Ist es besser das Agar in einem fast vollem Gefäs zu Sterilisieren und erst danach auf sterile Petrischalen zu geben?
Habe trotzdem versuche ein paar Pilzstücke auf das Agar zu legen aber leider ist dieser so weich das die Stücke auf dem
Boden sinken und sich mit dem Agar vollsaugen.

Als erstes wollte ich einfach mal sehen ob ich das Myzel vermehren kann, falls dies klappen würde könnte ich mit der Körnerbrut weitermachen.

Ich währe sehr froh etwas von euch erfahren zu können.
Vielen Dank

Gruss Spori

[Ständerpilz]

Hallo Spori,

wie hast du denn sterilisiert? Der DDKT muss mindestens so weit abkühlen, dass er komplett drucklos ist, bevor er geöffnet wird. Besser lässt man die Gläser/Petris mit dem Agar im DDKT bis auf Raumtemperatur abkühlen, dann erledigt sich auch das Kondenswasserproblem. Der Agar sollte während des Abkühlens nicht bewegt werden.

Der Agar sollte fest werden bei immerhin 1,4%. Du kannst auch auf 2% steigern, aber das Problem liegt sicherlich woanders.

Grüße

Oliver

[Spori]

Danke für die Antwort.
Der DDKT öffnet den Ventil automatisch bei normaldruck.
Auf Raumtemperatur habe ich es auch auskühlen lassen.
Ist das richtig dass die Behälter nicht luftdicht verschlossen im DDKT sterilisiert werden?
Komisch ist nur beim ersten mal kochen das Agar hart wird.
Sonst mische ich die Zutaten im kalten zustand und Sterilisiere erst dan.
Gruss Spori

[Ständerpilz]

Komisch ist nur beim ersten mal kochen das Agar hart wird.

Der Agar wird also hart? Wo ist dann das Problem?

Gläser dürfen nicht fest verschlossen sein, sonst klappt die Sterilisation nicht.

[Spori]

Also ich habe es so gemacht:
1. Alkoholfreies Bier gekocht biss keine Kohlensäure mer vorhanden war
2. Auf 0,5l Bier habe ich 8 Gramm Agar zugegeben und gut durchgemischt
3. Im warmen zustand in die Gläser gegeben
4. Bis ich das gemacht hatte wurde das Agar fest weil es auf Zimmertemperatur abgekühlt war
5. Die Gläser mit Alufolie in den DDKT gegeben und für ca. 1Stunde sterilisiert.
6. Auf Normaldruck unt Zimmertemperatur auskühlen gelassen
7. Darauf gewartet dass das Agar fest wird was nicht geschah.
Oder darf das Agar nur einmal erwärmen, würde das Problem erklären.
Bald sollten meine Petrischalen ankommen und ich werde es nochmals versuchen.
Danke
Gruss Spori

[Spori]

Hallo

Habe nun noch einige Versuche gestartet und es hat funktioniert.
Nun habe ich die Petris und das Agar zuerst sterilisiert und danach abgefüllt.
So wurde das Agar schön fest und das erste Myzel scheint auch zu wachsen.
Danke für die Hilfe

Gruss Spori

[Ständerpilz]

Hallo,

ich würde ein paar Tage mit dem Beimpfen warten und die Platten wegwerfen, wo sich Kontaminationen zeigen. Wenn sich keine zeigen hast du sauber gearbeitet!

Grüße

Oliver

[Spori]

Hallo Oliver

Hatte 2 Petris mal ohne Beimpfen zum test gegossen.
Bei diesen hat sich nichts gezeigt.
Auch bei den anderen sehe ich noch keine Kontis.
Habe 2 Stück mit weisem Champignon und 4 mit Kräuterseitling Beimpft.
Bei dem Champignon war in der Verpackung ein Stück substrat mit weisem Geflecht, diesen habe ich auf das Agar gelegt.
Bei diesem ist auch bereits einiges zu sehen, weis aber leider nicht ob es Myzel vom Champignon oder Schimmel ist.
Das zweite habe ich mit einem Stück vom Pilz Beimpft, da ist noch nicht zu sehen.
Bei den 4 Stück mit Kräuterseitling war bereits nach 24h etwas zu sehen und es breitet sich weiter aus.

Gruss Spori

[Spori]

Hallo

Hatte mit den Kräuterseitlingen auf Bieragar meine ersten Erfolge.
Jetzt will das Myzel aber nicht weiterwachsen, es hat sich auch leicht bräunlich verfärbt.
Könnte das Sauerstoffmangel sein ?
Habe es in relativ kleinen Petrischalen und Luftdicht versiegelt.

Danke Euch

[Ständerpilz]

Hallo Spori,

also ich verwende stets Parafilm (Labormaterial) zum Verschließen der Petris. Das ermöglicht einen Gasaustausch. Es gibt hier aber auch Leute, die Frischhaltefolie verwenden, vielleicht können die was dazu sagen. Es gibt übrigens auch Unterschiede bei Petrischalen (mit oder ohne Nocken für eine bessere Belüftung), das sollte aber eher nicht relevant sein.

Eine bräunliche Verfärbung hört sich aber nicht gut an. Wahrscheinlich ist das Mycel abgestorben. Die Ursache kann natürlich Sauerstoffmangel sein. Eigentlich braucht Myzel ja nicht mehr als Nährboden und Sauerstoff.

Kräuterseitling wächst ja eigentlich sehr schnell. Wenn du keine Möglichkeit hast an Parafilm heranzukommen, dann mach vielleicht mit einer Nadel ein paar kleine Löcher in die Frischhaltefolie. Parafilm ist leider nicht besonders billig. Bei mir reißt er auch nach einiger Zeit ein und ich muss ihn erneuern oder flicken.

Grüße

Oliver

[Spori]

Hallo Oliver

Danke für die Antwort.
Habe eine Bestellung getätigt mit grösseren Petris und auch Parafilm usw.
Ja ich hatte sie auch mit Frischaltefolie verschlossen.
Habe heute die Petris mal aufgemacht und neu verschlossen.
Mal sehen was passiert, schlimmer kann es glaub ich nicht werden.
Sind halt meine ersten Versuche, aber mit der Übung wird es wahrscheinlich dan besser.

Danke

Gruss Spori

[_Hatti_]

Hallo, ich hab mal probiert Wässrige Petris trocken zulegen!
Hat wunderbar funktioniert
Ich arbeite auch mit dem Parafilm der ja recht dehnfähig ist, so hab ich nun Versucht drei Glas-Petris Schräg zu stellen damit das Kondenswasser sich auf einer Seite sammelt. Nachdem das passiert ist habe ich die Petris langsam gedreht und den Oberen Deckel leicht angehoben so das die Flüssigkeit über den Rand in den Äußeren laufen konnte. Dank dem Parafilm ging das super und die Petris sind seit dem Trocken. Ich mach das so jetzt immer da ich nur 10 Petris zu laufen habe und so jede Petri etwas wird ( Bisher) Im übrigen sind die zwei linken Petris mit WAS gespickt die gefroren waren und dennoch Myzel bilden.
Lg Hatti

[_Hatti_]

Oh man, ich Prahler. Jede Petri wird was , sah alles ganz gut aus bis 9 von 10 Petris konits hatten.
Jetzt hab ich erst mal Versucht neue Petris aufzubauen.
Hat schon mal jemand von Euch mit der Dunstabzugshaube vorlieb genommen?
Ich hab wie in dem einen Post abgebildet ziemlich weit oben unterhalb der Haube versucht zu arbeiten.
Hoffe das wird diesmal was

[Dontmesswiththeoyster]

Nachdem das passiert ist habe ich die Petris langsam gedreht und den Oberen Deckel leicht angehoben so das die Flüssigkeit über den Rand in den Äußeren laufen konnte.

Ich hab da jetzt nicht mega die Erfahrung damit, aber ich denke, dass du damit eine Brücke für die Kontis gebaut hast, wodurch sie von außen nach innen klettern konnten (oder es waren vorher schon Sporen drin, die einfach ein paar Tage gebraucht haben um auszukeimen).

bis 9 von 10 Petris konits hatten.

Was für Kontis waren es? Falls es Bakterien waren, könntest du versuchen beim nächsten mal den Agar vorher z.B. mit Zitronensäure auf pH 4-5 anzusäuern. Gegen Schimmel hilft das leider nichts afaik.

vG
Julius

[_Hatti_]

ein paar waren typisch grün in den Ecken wo ich das Wasser ablaufen lassen habe, wiederum andere bildeten vom Außenrand erstmal nen weißen gegen part der dann ins gräuliche überging. Ich hab auch festgestellt das die Petris die ich relativ dicht am Boden vom Topf/Autoklav hatte, waren nicht mit kondenswasser belastet. Die anderen die ich höher Verbaute schon, lasse den Topf über nacht abkühlen und mach erst nach 24 Stunden quasi den Deckel auf und bestücke die Petris. funktioniert gut, mach ich vorher auf waren bisher alles verwässert.